神經(jīng)干細胞是一類能生成神經(jīng)組織貨源與神經(jīng)組織、具有自我更新能力、并能通過不對稱分裂能生成不同于自身的細胞。迄今，人們從哺乳動物的胚胎和發(fā)育中的未成年個體、成年個體的諸多腦區(qū)以及脊髓中都成功地分離了神經(jīng)干細胞。
    目前，神經(jīng)干細胞的分離方法主要有三種：無血清培養(yǎng)基自然篩選法、流失細胞術(shù)分選法、免疫磁珠分選法。我司采用的是無血清培養(yǎng)基自然篩選法。
    無血清培養(yǎng)基自然篩選法是迄今應(yīng)用，也是zui簡單和容易操作且行之有效的方法。其原理是利用特殊的培養(yǎng)基使成熟的神經(jīng)細胞無法較長時間地成活，而分離篩選出能夠在該培養(yǎng)條件下存活并增殖的神經(jīng)干細胞群體。首先將含神經(jīng)干細胞的神經(jīng)組織通過機械或酶解分散等方法制備成單細胞，然后培養(yǎng)于含有特殊營養(yǎng)添加劑和促增殖因子的不含血清的培養(yǎng)液中。非神經(jīng)干細胞在這種培養(yǎng)系統(tǒng)中由于營養(yǎng)缺陷無法較長時間地存活，而神經(jīng)干細胞則適應(yīng)該培養(yǎng)體系并在促增殖因子作用下生長增殖。因此，經(jīng)過培養(yǎng)一段時間之后，就可獲得通過這種自然篩選而增殖形成的呈神經(jīng)球狀生長的神經(jīng)干細胞群體。這種利用特殊培養(yǎng)基自然篩選神經(jīng)干細胞方法的優(yōu)點是：簡便易行，不需要特殊的儀器設(shè)備等條件，分離效率高，神經(jīng)干細胞損傷小易于成活。
    神經(jīng)干細胞在神經(jīng)損傷及退行性病變等的替代治療有很好的應(yīng)用前景，但人類胚胎神經(jīng)組織來源的神經(jīng)干細胞由于來源及倫理問題，使其應(yīng)用受到一定限制；應(yīng)用成體中的骨髓、脂肪等組織中存在的基質(zhì)細胞，經(jīng)誘導(dǎo)可分化為神經(jīng)干細胞，并經(jīng)誘導(dǎo)分化可形成神經(jīng)樣細胞，由于其優(yōu)點已引起廣泛深入的研究。兩者雖都可經(jīng)誘導(dǎo)分化為神經(jīng)樣細胞，但畢竟骨髓來源與神經(jīng)來源干細胞起源不同，其能力及特性仍有一定的差別。對于骨髓來源的神經(jīng)干細胞，其是否能zui終形成發(fā)揮功能作用的神經(jīng)細胞，尚需進行更深入、細致的實驗研究。本實驗室研制的Cytokine神經(jīng)干細胞培養(yǎng)基，對胚鼠室管膜神經(jīng)干細胞和骨髓來源的基質(zhì)細胞進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，均可形成形態(tài)相似的大圓細胞，經(jīng)RA等誘導(dǎo)分化，均可形成神經(jīng)樣細胞，并表達神經(jīng)細胞的標(biāo)志蛋白，但兩種不同來源的神經(jīng)干細胞在增殖能力等很多方面均有不同，其在形態(tài)上有何差異，嘗試以AFM來觀察兩種細胞，從形態(tài)上對兩者進行初步的比較研究。
    我司分離培養(yǎng)神經(jīng)干細胞的步驟大致如下：
    （1） 取胎腦。
    （2）加Trypsin/EDTA消化，用吸管吹吸使細胞均勻分散均勻。
    （3） 離心除去Trypsin/EDTA。
    （4）加神經(jīng)干細胞*培養(yǎng)基培養(yǎng)。
    當(dāng)神經(jīng)球較大或出現(xiàn)細胞貼壁分化時應(yīng)及時傳代。傳代經(jīng)過大致為：去除培養(yǎng)液；PBS洗滌；Trypsin/EDTA消化；離心，去上清；神經(jīng)干細胞*培養(yǎng)基重懸；按比例接種。